(单篇优先)网络出版时间:2017-07-12 09:56:53

血管性血友病因子抗原含量ELISA检测方法的建立、验证及应用

目的 建立检测人血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)抗原含量的双抗体夹心 ELISA 检测方法,并进行验证及初步应用。方法 用配对的 VWF 抗体进行棋盘滴定来确定最佳捕获抗体和检测抗体浓度,建立检测人VWF 抗原含量的双抗体夹心 ELISA 方法;用 VWF 国际标准品(NIBSC07/316)标定内控标准品(无 FⅧ的 VWF),确定 VWF : Ag 的国际单位(Ag / ml)与质量单位(滋g / ml)的关系;对建立的方法进行线性、准确度、精密度、样品稳定性验证;将验证后的该方法用于 FⅧ纯化工艺的监控及产品质量分析。结果 捕获抗体和检测抗体稀释度均为 1 : 200;VWF : Ag 的 1 Ag / ml 对应 16 mg / ml;标准曲线的线性范围为 160 ~ 10 ng / ml,各浓度回收率在 95. 8% ~103. 2%之间,变异系数(CV)< 5%,R 2逸 0. 99;不同浓度样品检测结果的批内回收率在 93. 0% ~ 113. 9%之间,批间回收率在 95. 1% ~ 105. 5%之间;批内CV 在0. 7% ~ 8. 2%之间,批间CV 在3. 8% ~ 9.6 %之间;样品添加试验的回收率在 96. 9% ~ 114. 7%之间。具有生物学活性的样品应-80 益冻存,复融 1 次后立即检测;国药集团武汉血液制品有限公司 F峪纯化工艺中 PEG 沉淀和离子交换层析去除了 95%以上的 VWF,工艺稳定性较好,成品具有与血浆接近的 F峪 颐 Ag 辕 VWF 颐 Ag 比值。结论 建立的人 VWF 抗原含量双抗体夹心 ELISA 检测方法具有良好的线性、准确度和精密度。用该方法进行 VWF 的抗原含量检测可作为 F峪纯化工艺内部质量控制的一个指标。关键词: 血管性血友病因子;抗原含量;酶联免疫吸附测定

血管性血友病因子; 抗原含量; 酶联免疫吸附测定;

10.13200/j.cnki.cjb.001780

R392-33

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