(单篇优先)网络出版时间:2017-06-09 10:43:17
GB/T 7714-2015 格式参考文献: . 法舒地尔阻断Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶-1触发C2C12成肌细胞呼吸功能异常介导肌肉萎缩[J/OL]. 第二军医大学学报:1-8.(2017-06-09). http://kns.cnki.net/kcms/detail/31.1001.R.20170609.1043.016.html .

法舒地尔阻断Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶-1触发C2C12成肌细胞呼吸功能异常介导肌肉萎缩

目的 明确法舒地尔(fasudil)能否阻断Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶-1(ROCK1)激活导致的C2C12成肌细胞呼吸功能异常,并阻断肌肉萎缩的发生。方法 体外培养C2C12成肌细胞,给予2%的马血清诱导分化为成熟肌小管细胞,根据给予不同处理将其分成4组:Ad-GFP组,仅转染腺病毒载体GFP;Ad-ROCK1组,转染腺病毒载体ROCK1诱导细胞过表达ROCK1;Ad-GFPF组,转染腺病毒载体GFP,并给予10?mol/L fasudil刺激;Ad-ROCK1F组,转染腺病毒载体ROCK1诱导细胞过表达ROCK1,并给予10?mol/L fasudil刺激。通过Seahorse能量代谢分析仪评估不同刺激条件下C2C12成肌细胞的细胞耗氧率(OCR)及胞外酸化率(ECAR),以明确ROCK1过表达和fasudil刺激对C2C12成肌细胞呼吸功能的影响。采用Mito Tracker?红色荧光探针测定线粒体裂变情况。蛋白质印迹法检测ROCK1,线粒体动力相关蛋白1(Drp1)及其磷酸化pDrp1、肌肉萎缩相关蛋白E3泛素连接酶指环肌蛋白-1(Mu RF1)和肌肉萎缩F-box(MAFbx,又称Atrogin-1)的表达。结果 Seahorse分析结果显示,与Ad-GFP组比较,Ad-ROCK1组C2C12成肌细胞OCR及ECAR明显增加,细胞的基础呼吸、最大呼吸及偶联ATP产生所需的呼吸增加,差异均有统计学意义(P<0.01);同时,Mito-tracker?荧光探针结果显示Ad-ROCK1组细胞线粒体裂变增加,线粒体大小频数分布左移。给予fasudil刺激后,Ad-ROCK1F组C2C12成肌细胞OCR和ECAR较AdROCK1组明显减少,并且fasudil刺激能改善ROCK1过表达导致的基础呼吸和最大呼吸的增加(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示,Ad-ROCK1F组p-Drp1/Drp1比例、ROCK1、Mu RF1和Atrogin1的表达较Ad-ROCK1组减少(P<0.05)。结论 Fasudil作为ROCK1的抑制剂,可阻断体外培养C2C12成肌细胞ROCK1过表达导致的细胞呼吸异常,并减少线粒体动力相关蛋白的活性和肌肉萎缩相关蛋白的表达。

国家自然科学基金(81470970).Supported by National Natural Science Foundation of China(81470970);

慢性肾脏病; 肌肉萎缩; 细胞呼吸功能异常; ROCK1; 法舒地尔;

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