(单篇优先)网络出版时间:2017-06-09 10:49:46
GB/T 7714-2015 格式参考文献: . 主被动双靶向纳米凝胶递送RRM2-siRNA体外抗肿瘤效应研究[J/OL]. 第二军医大学学报:1-10.(2017-06-09) []. http://kns.cnki.net/kcms/detail/31.1001.R.20170609.1049.018.html .

主被动双靶向纳米凝胶递送RRM2-siRNA体外抗肿瘤效应研究

目的 制备靶向输送针对核糖核苷酸还原酶(ribonucleotide reductase,RR)小亚基M2(RRM2)的小干扰核糖核酸(si RNA)的聚N-异丙基丙烯酰胺/聚乙烯亚胺(PNIPAM/PEI)纳米凝胶,通过研究其体外的抗肿瘤效应,以期构建新型的靶向纳米凝胶递送基因系统。方法 采用自由基接枝共聚合(radical graft copolymerization)反应制备具有“核-壳”结构的PNIPAM/PEI聚阳离子温度敏感型纳米凝胶,评价其粒径、zeta电位等理化性质;根据电荷相互作用原理,并通过偶联抗人表皮生长因子受体2(anti-HER2)抗体,形成包裹RRM2-si RNA的靶向性PNIPAM/PEI-si RNA纳米凝胶复合体。利用凝胶电泳确定PNIPAM/PEI-si RNA纳米凝胶复合体包裹si RNA效果,通过荧光显微镜定性观察和流式细胞术定量检测NCI-N87细胞对纳米凝胶复合体的摄取情况,利用实时定量PCR法检测纳米凝胶递送si RNA后靶基因RRM2的表达情况,用Transwell检测该纳米凝胶复合体对HER2表达阳性的肿瘤细胞迁移的影响。结果 通过化学合成具有“核-壳”结构的温度敏感型PNIPAM/PEI纳米凝胶,动态光散射表明制备的纳米凝胶的颗粒均匀,粒径大小约为359.8 nm,zeta电位为21.4m V。在此基础上,我们制备出靶向凝胶包裹RRM2-si RNA的纳米凝胶复合体,确定最佳包裹比例为N/P=60(N/P比:聚阳离子纳米凝胶中氨基与质粒DNA中磷酸基的摩尔比)。不同温度下(37℃、42℃)细胞内吞实验证实该纳米凝胶复合体具有良好的靶向性和温度响应性;且可以下调靶基因RRM2的表达水平,抑制肿瘤细胞NCI-N87的迁移。结论 成功制备抗体靶向的温度敏感型PNIPAM/PEI聚阳离子纳米凝胶,其可以结合并投递si RNA进入靶细胞,该纳米复合体可以作为新型肿瘤基因治疗的给药系统。

国家自然科学基金(31470964; 81171450).Supported by National Natural Science Foundation of China(31470964;

纳米凝胶; 抗体靶向; 温度敏感性; 药物递送系统; si RNA;

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