青蒿素对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化应激损伤的抑制作用

目的探讨青蒿素对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化应激损伤的抑制作用。方法将ARPE-19细胞接种于96孔板,每孔7×103个细胞,细胞贴壁后分别加入不同浓度青蒿素,筛选对细胞增殖有效的最佳药物浓度。将APRE-19细胞分成4组。对照组:不做特殊处理;过氧化氢组:加入100μmol·L-1过氧化氢作用细胞24 h;青蒿素组:加入青蒿素30μmol·L-1,作用细胞24 h;青蒿素预保护组:加入30μmol·L-1青蒿素预保护细胞24 h后加入100μmol·L-1过氧化氢作用24 h。利用MTT法筛选青蒿素对ARPE-19细胞作用的最佳药物浓度;通过Hoechst33342染色及线粒体膜电位观测细胞凋亡情况;检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量和活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)阳性细胞数; Western blot法检测相关蛋白表达水平。结果 MTT法检测发现,30μmol·L-1的青蒿素对细胞增殖作用最强(均为P <0. 01)。青蒿素预保护组与过氧化氢组相比,细胞增殖率升高,凋亡细胞数显著减少,差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。线粒体膜电位染色显示,青蒿素预保护组与过氧化氢组相比绿色染色减少,红色染色增多,说明青蒿素预保护组凋亡细胞数减少。与对照组相比,青蒿素组ARPE-19细胞中SOD含量显著增加(P <0. 05);与过氧化氢组相比,青蒿素预保护组细胞内SOD含量明显增高(P <0. 05),说明青蒿素能增加细胞内抗氧化物质,减少细胞凋亡。与对照组相比,青蒿素组ROS阳性细胞减少(P <0. 05);与过氧化氢组相比,青蒿素预保护组ROS阳性细胞亦明显减少(P <0. 05),说明青蒿素可减少过氧化氢诱导的活性氧物质积聚。通过Western blot检测发现,青蒿素能促进ARPE-19细胞内AKT的磷酸化,过氧化氢组ARPE-19细胞内Caspase-3、PARP、Keap1相对表达升高,Bcl-2、Nrf2、HO-1降低;青蒿素预保护组ARPE-19细胞内Caspase-3、PARP、Keap1相对表达降低,Bcl-2、Nrf2、HO-1升高,差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。结论青蒿素通过调节Nrf2/keap1信号通路来减小过氧化氢诱导的ARPE-19细胞的氧化应激损伤。

国家自然科学基金资助(编号:31571184); 辽宁省科技厅-锦州医科大学联合基金项目(编号:20170540382)~~;

青蒿素; 视网膜色素上皮细胞; 老年性黄斑变性; 氧化应激;

10.13389/j.cnki.rao.2019.0069

R77

264306-31163795K
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