(排版定稿)网络首发时间:2019-04-16 17:07:40

转化生长因子-β(TGF-β)空间动态分布的角膜基质创伤修复体外三维培养体系的构建

目的 研究构建模拟角膜基质创伤修复过程中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)空间动态分布的体外三维培养系统。方法 从新鲜牛眼中分离角膜基质细胞,用含体积分数10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的DMEM/F12培养基进行培养,而后构建Pellet体外三维培养模型进行培养。将Pellet分为有透析袋组和无透析袋组,置入Transwell小室系统上下室中培养48 h后换液,上室为0.50μg·L-1TGF-β1+0.25μg·L-1TGF-β2+体积分数10%FBS,下室为体积分数10%FBS,分别于培养后72 h观察Pellet培养模型的形态变化并采用Real-time PCR法分别检测2组上下室Pellet中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)和ColⅢmRNA相对表达量。结果 培养后72 hPellet均呈团状生长。有透析袋组Transwell小室系统上、下室α-SMA mRNA表达量分别为1.595±0.025、1. 148±0. 009,FN mRNA表达量分别为1. 090±0. 011、0. 844±0. 015,ColⅠmRNA表达量分别为1.445±0. 035、1. 165±0.008,ColⅢmRNA表达量分别为1.726±0.031、1. 314±0.020,ColⅢ/ColⅠ比值分别为1. 126±0.019、0. 957±0.013,上下室各项指标比较差异均有统计学意义(均为P=0.000)。无透析袋组Transwell小室系统上、下室α-SMA mRNA表达量分别为1.363±0. 018、1.360±0.002,FN mRNA表达量分别为0.946±0.017、0·952±0.012,ColⅠmRNA表达量分别为1.261±0.011、1.258±0.029,ColⅢmRNA表达量分别为1.459±0.027、1.462±0.033,ColⅢ/CodⅠ比值分别为1. 157±0.029、1.163±0.090,上下室各项指标比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。无透析袋组上室细胞中α-SMA、FN、ColⅠ和ColⅢmRNA的相对表达量与有透析袋组上室、有透析袋组下室比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。无透析袋组下室细胞中α-SMA、FN、ColⅠ和ColⅢmRNA的相对表达量与有透析袋组上室、有透析袋组下室比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 Transwell小室系统与透析袋相结合可构建模拟TGF-β空间动态分布的体外三维培养系统。

国家自然科学基金资助(编号:81360144、81060076); 广西自然科学基金资助(编号:2017-GXNSFAA198250);

角膜基质细胞; 转化生长因子-β; 三维培养; 创伤修复; 瘢痕化;

10.13389/j.cnki.rao.2019.0070

R772.2

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眼科新进展

Recent Advances in Ophthalmology

ISSN:1003-5141

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