(排版定稿)网络首发时间:2019-04-17 09:14:11

3D共培养模型对体外培养兔角膜缘干细胞的影响

目的 探讨三维(three-dimension, 3D)共培养模型对体外扩增兔角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs)的作用。方法 体外培养兔LSCs,以牙周膜干细胞(human periodontal stem cell,HPDLSCs)作为饲细胞建立共培养模型,根据载体不同分为3组,纤维蛋白胶组:将兔LSCs、HPDLSCs、纤维蛋白胶3 D共培养;羊膜组:将兔LSCs、HPDLSCs、羊膜3D共培养;对照组:将兔LSCs、HPDLSCs共培养。共培养5 d后,用倒置显微镜、HE染色、扫描电镜观察兔LSCs的细胞形态,采用免疫荧光染色检测各组兔LSCs阳性标志物P63的表达,并比较各组P63的阳性率。结果 共培养5 d后,倒置显微镜、HE染色观察细胞形态,羊膜组、纤维蛋白胶组细胞排列紧密,呈大小不等的团块状集落,细胞大小基本一致;对照组细胞排列相对稀疏;扫描电镜下观察见纤维蛋白胶组和羊膜组细胞与载体贴附良好。免疫荧光染色显示纤维蛋白胶组、羊膜组和对照组LSCs的p63阳性率分别为(69.93±8. 76)%、(78. 36±8. 56)%和(58. 59±8.31)%,三组间总体比较差异有统计学意义(F=9.43,P=0.000)。两两比较中纤维蛋白胶组、羊膜组LSCs的p63阳性率均大于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。纤维蛋白胶组、羊膜组的p63阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 以纤维蛋白胶、羊膜作为载体,HPDLSCs作为饲细胞的3D共培养模型有助于体外扩增兔LSCs。

新疆维吾尔自治区科技支疆项目(编号:201491171); 解放军第四七四医院重点扶持科研项目(编号:2017474006、2018474008);

角膜缘干细胞; 纤维蛋白胶; 羊膜; 3D共培养;

10.13389/j.cnki.rao.2019.0074

R77

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眼科新进展

Recent Advances in Ophthalmology

ISSN:1003-5141

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