目的建立稳定干扰多梳状蛋白2(polycomb like 2,PCL2)的人胶质瘤U251细胞系。方法针对PCL2基因的shRNA克隆至miR30前体骨架shRNA表达载体,用PCR鉴定载体构建成功后转入HEK293细胞,得到重组腺病毒Ad5-E1-AmU6-PCL2 shRNA-E3-CMV-eGFP;将重组腺病毒转染至U251细胞中,分组为空白对照组、空载体组和PCL2 shRNA组,滴度梯度设置为MOI(20∶1,50∶1,100∶1),使用荧光显微镜观察腺病毒感染效率;用Western blot检测U251细胞内shRNA PCL2表达载体的基因沉默效率。结果使用小RNA干扰技术,成功构建了表达PCL2 shRNA的重组腺病毒;荧光显微镜观察发现MOI(50∶1)时,U251细胞感染效率最高,细胞生长状态良好。Western blot结果显示PCL2 shRNA重组腺病毒组的PCL2蛋白水平较空白对照组和空载体组明显降低,以100∶1时的PCL2表达量最低,干扰效果最显著。结论成功构建的PCL2 shRNA重组腺病毒能够在体外有效感染U251细胞,降低U251细胞中PCL2的蛋白表达并筛选出稳定沉默的细胞系。

国家自然科学基金(81460433); 宁夏自然科学基金(NZ15177); 宁夏高等学校一流学科建设(宁夏医科大学西部一流建设学科基础医学)资助项目(NXYLXK2017B07); 陕西省自然科学基础研究计划-青年人才项目(2016JQ8001);

多梳状蛋白2; U251细胞; shRNA; microRNA-30; 胶质瘤;

10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2019.06.004

R739.41

2556-56051493K
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