(录用定稿)网络首发时间:2019-09-04 10:52:17

MicroRNA319作为最保守的miRNA家族之一,其在植物器官形态建成、激素信号转导、抵抗外界胁迫等途径中均有重要作用。为了解miR319在植物体胚中的调控途径,利用龙眼转录组数据库筛选miR319成熟体(miR319)和前体序列(pre-miR319),并通过DNAMAN 6.0和Mfold分析miR319的定位和pre-miR319的二级结构;进而采用TAPIR和psRNAtarget预测选定的miR319成员的内源诱捕靶标(eTM,Endogenous Target Mimics)及候选靶标,并通过RLM-RACE验证靶标裂解位点,最后分析eTM、miR319及其靶标在龙眼体胚发生早期的表达模式。结果显示,龙眼4个miR319成员有1个定位于miR319a scafflod517,有3个定位于miR319a scaffold225。因此,以miR319a scaffold225为研究对象,将其命名为pre-miR319a,其上的成熟体分别命名为miR319a-3p.1、miR319a-5p.1和miR319a-5p.2。裂解位点显示龙眼miR319a 3个成员中,miR319a-3p.1的靶基因为TCP2和TCP4 (Dlo_022819.1,Dlo_026743.1),miR319a-5p.1的靶基因为吲哚-3-甘油磷酸合成酶(IGS)和ABI3-5抑制因子,miR319a-5p.2未验证到靶基因。qPCR显示,在龙眼早期体胚发生过程中,miR319a 3个成员的表达模式基本一致,呈显著上调趋势。另外,除eTM8637外,其余eTM的表达模式与其相应的miR319a成员基本呈现为负相关趋势,均为下调趋势。miR319a-3p.1与其靶基因基本呈现为负调控趋势,miR319a-5p.1与ABI3-5抑制因子在龙眼早期体胚发生后期呈现负调控,与IGS没有明显负相关。本试验结果初步验证了“eTM-miR319a-靶基因”信号途径可能参与到龙眼早期体胚发生的形态建成。

国家自然科学基金项目(31672127,31572088); 福建省高原学科建设经费(102/71201801101); 福建农林大学园艺学院优秀硕士学位论文资助基金(2018S02); 福建农林大学科技创新专项基金(CXZX2017187)资助;

龙眼; miR319; 内源诱捕靶标; 靶基因; 体胚发生;

10.19675/j.cnki.1006-687x.2019.07062

S667.2

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