(录用定稿)网络首发时间:2020-04-13 14:13:17

严重急性呼吸综合征冠状病毒2核衣壳蛋白原核表达、纯化及其抗血清制备

秦照玲彭浩然丁翠玲肖爱军戚中田赵平

目的 用大肠杆菌表达出重组的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核衣壳(N)蛋白,通过免疫小鼠制备SARS-CoV-2 N蛋白抗血清。方法 将含有SARS-CoV-2 N基因的pET28a(+)原核表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导蛋白表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化SARS-CoV-2 N重组蛋白;将SARS-CoV-2 N重组蛋白联合锰佐剂通过肌肉和皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,获得抗血清;用蛋白质印迹分析检测SARS-CoV-2 N重组蛋白与SARS-CoV-2 N单抗及SARS-CoV N多抗的反应;用间接免疫荧光检测小鼠抗血清与真核表达质粒转染细胞中SARS-CoV-2 N蛋白的反应。结果 成功诱导大肠杆菌表达出可溶性的SARS-CoV-2 N蛋白,相对分子质量约为55 000,纯化出该重组蛋白;蛋白质印迹分析结果显示该蛋白能与SARS-CoV-2 N单抗及SARS-CoV N多抗结合;间接免疫荧光检测结果表明制备的小鼠抗血清能与哺乳动物细胞中表达的SARS-CoV-2 N蛋白结合。结论 成功表达、纯化出SARS-CoV-2 N重组蛋白,并制备出该蛋白的小鼠抗血清,为后续建立SARS-CoV-2快速诊断方法及SARS-CoV-2 N蛋白的功能研究奠定了基础。

国家重点研发计划(2016YFC1200401); 国家重大科技专项(2017ZX10304403-003);

新型冠状病毒; 核衣壳蛋白; 原核表达; 抗血清;

R392

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