新风胶囊含药血清对TNF-α诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡和炎症的影响

文建庭¹刘健²王馨¹王杰¹

1. 安徽中医药大学 2. 安徽中医药大学第一附属医院风湿科

摘要：观察新风胶囊（XFC）含药血清对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞（FLS）凋亡和炎症的影响,探讨XFC治疗RA的作用机制。建立RA-FLS永生化细胞系,制备XFC含药血清,用cell counting kit-8（CCK-8）、酶联免疫吸附法（ELISA）、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、免疫荧光、原位末端转移酶标记（TUNEL）法观察XFC含药血清对RA-FLS凋亡和炎症指标的影响。CCK-8结果显示,TNF-α对RA-FLS最佳干预浓度和时间分别为10 ng·mL^-1和48 h,XFC对RA-FLS的最佳干预浓度和时间分别为6.48 mg·g^-1和72 h。ELISA结果表明,与RA-FLS组相比,TNF-α+RA-FLS组TNF-α,白细胞介素（IL）-1β,IL-6,IL-8的表达均显著升高,IL-4和IL-10的表达均显著降低（P<0.01）;经XFC含药血清干预后,TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8的表达均显著下降,IL-4和IL-10的表达均显著升高（P<0.01）。RT-qPCR结果表明,与RA-FLS组相比,TNF-α+RA-FLS组Fas、FasL、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、caspase-8、Bax、Bcl-X1 mRNA的表达均显著降低,B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）mRNA的表达显著升高（P<0.001）;经XFC含药血清干预后,Fas,FasL,caspase-3,caspase-8,Bax,Bcl-X1 mRNA的表达均显著升高,Bcl-2 mRNA的表达显著下降（P<0.01）。免疫荧光结果表明,与RA-FLS组相比,TNF-α+RA-FLS组caspase-3和Bax蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高（P<0.05）;经XFC含药血清干预后,caspase-3和Bax蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低（P<0.05）。TUNEL结果表明,与RA-FLS组相比,TNF-α+RA-FLS组细胞凋亡减少（P<0.05）;经XFC含药血清干预后,细胞凋亡显著增多（P<0.05）。促进RA-FLS凋亡、抑制其炎症反应是XFC治疗RA的作用机制之一。

关键词：

新风胶囊; 滑膜成纤维细胞; 凋亡; 炎症反应;

基金资助：

国家重点研发计划项目（2018YFC1705204）；安徽省重点研究和开发计划对外科技合作项目（201904b11020011）;安徽省重点研究与开发计划项目（201904a07020004）；安徽省省级质量工程教学研究项目（2018jyxm1068）；安徽省名中医刘健工作室建设项目（中医药发展秘[2018]11号）；安徽现代中医内科应用基础与开发研究省级实验室项目（2016080503B041）；安徽省第12批“115”创新团队项目（皖人才办[2019]1号）；